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MILLIPOREECL化學(xué)發(fā)光底物發(fā)光時間長可反復(fù)曝光
瀏覽次數(shù):4012發(fā)布日期:2017-09-20
 
  
  MILLIPOREECL化學(xué)發(fā)光底物是指在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并zui終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物。在發(fā)光免疫技術(shù)中常用的化學(xué)發(fā)光底物有以下幾類。
  
  1.氨基苯二酰肼類主要是魯米諾及異魯米諾衍生物,是zui常用的一類化學(xué)發(fā)光劑。魯米諾(luminol,5'-氨基-2,3-二氫-1,4-酞嗪二酮)的分子結(jié)構(gòu)及化學(xué)反應(yīng)式如下:
  
  魯米諾反應(yīng)結(jié)構(gòu)式
  
  魯米諾在免疫測定中既可用作標(biāo)記物,也可用作過氧化物酶的底物。異魯米諾衍生物ASEI和ABMI等也是常用的標(biāo)記物。
  
  2.吖啶酯(acridiniumester,AE)類類發(fā)光劑不需催化劑的存在,在有過氧化氫的稀堿溶液中即能發(fā)光。反應(yīng)式如下:
  
  電化學(xué)發(fā)光原理
  
  上式反應(yīng)迅速,在1~5s內(nèi)即可完成;具有背景低、信比高的優(yōu)點,其檢測極限可達5×10-9mol,發(fā)光量與AE濃度呈良好的線性反應(yīng),是一類的標(biāo)記物。
  
  3.電化學(xué)發(fā)光(electrochemiluminescence,ECL)反應(yīng)在電極表面進行。發(fā)光底物為三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)32+],另一反應(yīng)物為三丙胺(TPA)。在陽電極表面,以上兩化學(xué)物質(zhì)可同時失去電子發(fā)生氧化反應(yīng)(圖2)。二價的Ru(bpy)32+被氧化成三價Ru(bpy)33+,TPA被氧化成陽離子自由基TPA+●,后者失去一個質(zhì)子(H+),成為自由基TPA●,這是一個強還原劑,可將一個電子遞給三價的Ru(bpy)32+*,而TPA自身被氧化成TPA氧化產(chǎn)物。激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)32+*在衰減時發(fā)射一個波長為620nm的光子,重新生成基態(tài)的Ru(bpy)32+。這一過程在電極表面周而復(fù)始地進行,產(chǎn)生許多光子,使信號得以增強。
  
  4.MILLIPOREECL化學(xué)發(fā)光底物產(chǎn)品特點
  
  靈敏:信號強背景低,所需抗原抗體量少。
  
  持久:發(fā)光時間長,可進行反復(fù)曝光,進行結(jié)果優(yōu)化,而不需要重復(fù)Blot。
  
  快捷:MILLIPOREECL化學(xué)發(fā)光底物操作簡單方便,且數(shù)秒內(nèi)即可產(chǎn)生強烈信號。
  
  定量:使用反射型顯像密度計或者CCD相機掃描已曝光的X光片,可對目的蛋白進行定量。
  
  穩(wěn)定:產(chǎn)品有效期長,4℃可保存1年;且曝光后X光片上的印跡不褪色,可使實驗結(jié)果長期保存。
  
  
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